保健可能作为香料添加

液体型保健食品包括口服液、种方中苯饮料、法测保健酒等品种，定液的含由于含糖类或蛋白质等营养物质，体型在生产和贮藏过程中易氧化变质或受微生物污染而败坏，保健因此，食品通常会添加适量的甲醇防腐剂达到延长保质期的目的。苯甲酸、种方中苯山梨酸、法测对羟基苯甲酸酯类等为常用的定液的含防腐剂，但在实验中发现，体型部分口服液型保健食品中加入了苯甲醇，保健可能作为香料添加，食品也可能为了达到防腐抑菌的甲醇效果。

苯甲醇是种方中苯药用辅料，收载于美国FDA《非活性物质指南》中，是药膏或药液中常用的抑菌剂，一般用量为1～2%。苯甲醇在体内主要由肝脏代谢，易被氧化成苯甲醛和苯甲酸，已有动物毒理实验证明，苯甲酸的口服LD50为1250～1996mg/kg(鼠)，苯甲醇的口服LD50为1580mg/kg(鼠)，二者具有接近的LD50值，说明苯甲醇具有与苯甲酸类似的毒性。2019年12月1日起施行的《保健食品备案产品可用辅料及其使用规定(2019年版)》中规定，苯甲酸及其钠盐在液体制剂中的最大使用量为1g/kg，未列出苯甲醇及其使用规定。在GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中，苯甲醇为允许使用的食品合成香料，是否可用作食品防腐剂未作规定。国外对于食品中苯甲醇、苯甲酸、苯甲酸盐等多类苄基化合物的总使用限值有明确要求，1996年FAO/WHO食品添加剂联合专家委员会(JECFA)规定食品添加剂中苯甲酸(JECFAnumber850)、苯甲酸盐、苯甲醛(JECFAnumber22)、苯甲酸乙酯(JECFAnumber23)、苯甲醇(JECFAnumber25)和苯甲酸苄酯(JECFAnumber24)最高每日允许摄入量(ADI)为0～5mg/kg体重(以苯甲酸当量计)，并在2001年第57次JECFA会议中保持了这一结论。

近年来，对于苯甲醇的研究多集中在生产工艺和在药品领域的应用上，针对保健食品中苯甲醇含量测定的报道不多，国家尚未颁布食品中苯甲醇的测定方法，可见，建立保健食品中苯甲醇的含量测定方法，对于加强保健食品中食品添加剂的监控，保障食品安全，具有十分重要的意义。本研究以液体型保健食品为研究对象，建立了气相色谱、高效液相色谱和气相色谱-质谱联用三种苯甲醇的测定方法，并比较了三种方法的优缺点和适用范围，希望能够为建立苯甲醇测定的标准方法、制定合理的限值范围提供参考依据。

一、实验部分

1、气相色谱法

（1）溶液的制备

精密称取苯甲醇对照品50mg置于50mL量瓶中，加无水乙醇稀释并定容，得对照品储备液。取样品混匀，精密称取1.0g，置于10mL量瓶中，加无水乙醇溶解并超声提取10min，冷却至室温后定容，0.22μm滤膜滤过，得样品溶液。

（2）色谱条件

色谱柱:J&WDB-WAX(60mx0.25mmx0.25μm)，升温程序为初始温度150℃，10℃/min升到180℃，保持3min，20℃/min升到230℃，保持5min；载气为氮气，恒流速度1.0mL/min，分流比10:1，检测器温度250℃，进样口温度240℃，进样量1μL。

2、高效液相色谱法

（1）溶液的制备

精密称取苯甲醇对照品25mg置于10mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀释并定容，得对照品储备液。取样品混匀，精密称取1.0g置于25mL量瓶中，加适量50%甲醇溶液超声提取10min，冷却至室温后定容，0.22μm滤膜滤过，得样品溶液。

（2）色谱条件

色谱柱:AgilentZORBAXEclipseXDB-C18(4.6x250mm，5μm)，流动相为甲醇(A)-20mmo/L乙酸铵溶液(B)，梯度洗脱(0～8min，10%A；8.1～20min，30%A；20.1～30min，10%A)，流速为1.0mL/min，进样量为10uL，柱温为35℃，检测波长为210nm。

3、气相色谱-质谱法

（1）溶液的制备

对照品储备液同气相色谱法项下储备液。取样品混匀，精密称取1.0g，置于10mL量瓶中，加无水乙醇溶解并超声提取10min后定容，0.22μm滤膜滤过，精密量取续滤液0.1mL置于10mL量瓶中，加无水乙醇定容，得样品溶液。

（2）色谱与质谱条件

色谱条件:色谱柱为J&WDB--624UI(60mx0.25mmx1.4μm)，升温程序为初始温度60℃，保持1min，以50℃/min升温至150℃，保持2min，再以10℃/min升温至250℃，保持26min；载气为氦气，初始流量1mL/min，保持20min，以2mL/min升至2mL/min，保持20min，进样口温度250℃，分流比10:1，进样量1μL。

质谱条件:传输线温度260℃，离子源温度280℃，离子化方式EI，电子能量70eV，延迟时间7.3min，检测方式为全扫描(m/z30～300)和SIM选择离子监测模式(定量离子79.0m/z，定性离子107.0m/z和108.0m/z)。

二、结果与讨论

1、系统适用性

苯甲醇在GC、HPLC、GC-MS三个系统上的色谱图见图1～图3。样品在目标峰位置无杂质干扰。另外，考察了山梨酸、苯甲酸和苯甲醇三种组分的混合溶液在三个系统中的分离效果，结果分离度均大于1.5，满足系统适用性的要求。

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